《動(dòng)脈粥樣硬化》 五、堿性蛋白的信使傳遞途徑

堿性蛋白Ⅰ和堿性蛋白Ⅱ可能是通過(guò)第二信使系統(tǒng)介導(dǎo)而影響細(xì)胞甘油三酯和膽固醇酯的代謝。Peter選擇蛋白激酶C（PKC）的激活劑和抑制劑來(lái)研究BPⅠ、BPⅡ的作用途徑，H-7是PKC較為有效的抑制劑，其作用是參與ATP競(jìng)爭(zhēng)而不是與Ca2+或磷脂相互作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，H-7抵消了HyperApoB患者細(xì)胞對(duì)BPⅠ的反應(yīng)性，而且HyperApoB患者細(xì)胞對(duì)BPⅡ異常反應(yīng)也被高濃度的H-7所遏制。在缺乏BPs時(shí)，PKC的激活劑C：8能同樣有效地剌激正常細(xì)胞和HyperApoB患者細(xì)胞，表明在HyperApoB細(xì)胞，經(jīng)甘油二酯（DG）途徑激活PKC的過(guò)程無(wú)異常。但當(dāng)BPs存在時(shí)，HyperApoB細(xì)胞的代謝缺陷并不因?yàn)镻KC的激活劑C：8的出現(xiàn)而有所改善，所以HyperApoB的代謝缺陷不是在DG-PKC途徑，而在第二信使系統(tǒng)的其他環(huán)節(jié)上。

Baldo也認(rèn)為ASP是通過(guò)蛋白激酶C（PKC）途徑介導(dǎo)而發(fā)揮生物效應(yīng)的，因?yàn)镻KC的激活劑豆寇酰佛波乙酯（PMA）和1-油?；?2-乙酰-rar-甘油（OAG）能模擬ASP的生物效應(yīng)，當(dāng)成纖維細(xì)胞對(duì)PMA和OAG的反應(yīng)性處于飽和狀態(tài)時(shí)，改變培養(yǎng)基中的ASP濃度，并不能使甘油三酯的合成增加；PKC特異性抑制劑星形孢菌素Cal-phostinC和GF109203x也可完全抑制ASP的生物活性；ASP可使細(xì)胞內(nèi)DG合成增加，而DG是PKC的有效激活劑；ASP激活PKC從胞漿轉(zhuǎn)位到細(xì)胞膜，使細(xì)胞膜對(duì)脂肪酸的吸收和葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)增加。

為了進(jìn)一步明確HyperApoB患者的細(xì)胞變異環(huán)節(jié)，1995年，Kwiterovich采用染料木黃酮（genistein）作為探針來(lái)研究正常細(xì)胞和HyperApoB患者細(xì)胞對(duì)BPⅠ的反應(yīng)性。結(jié)果顯示木黃酮存在時(shí)正常細(xì)胞和HyperApoB患者成纖維細(xì)胞的脂質(zhì)代謝存在明顯差異，可以推測(cè)酪氨酸蛋白激酶（TPK）的磷酸化在HyperApoB病理生理過(guò)程中扮演重要角色，且這一現(xiàn)象也被其他兩種TPK抑制作用所證實(shí)（herbimycinA和tryphostinA47）。

在缺乏BPⅠ的F-12培養(yǎng)基中補(bǔ)充木黃酮（92.5nmol/ml），正常細(xì)胞甘油三酯含量下降10%，而HyperApoB患者成纖維細(xì)胞中總膽固醇和非酯化膽固醇含量下降25%。正常成纖維細(xì)胞和HyperApoB患者成纖維細(xì)胞中總膽固醇和非酯化膽固醇的量都顯著減少，且HyperApoB患者成纖維細(xì)胞這兩種脂質(zhì)下降更顯著，還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯有何變化。當(dāng)用BPⅠ和木黃酮（或者h(yuǎn)erbimycinA、tryphostinA47）處理培養(yǎng)基后，正常細(xì)胞合成甘油三酯的量與只用BPⅠ處理HyperApoB細(xì)胞合成甘油合成甘油三酯的量一致。這些現(xiàn)象表明，BPⅠ的生物活性，是通過(guò)位于細(xì)胞膜上TPK所介導(dǎo)的HyperApoB細(xì)胞，對(duì)BPⅠ反應(yīng)性缺失，由于TPK的磷酸化為一些TPK的抑制劑所阻斷，經(jīng)木黃酮處理的正常細(xì)胞和HyperApoB細(xì)胞仍對(duì)BPⅠ有一些殘余反應(yīng)，其機(jī)理有待進(jìn)一步探討。

非受體型TPK包括SH2和SH3兩個(gè)功能域，通過(guò)磷酸化作用，激活跨膜受體TPK，實(shí)際上SH2和（或）SH3蛋白是磷脂酶C-r（PLC-r）、ras-GTP酶活化蛋白（ras GAP）和磷脂酰肌醇3激酶（pI-3K）的同系物，其功能是裂解4，5二磷脂酰肌醇為DG和三磷酸肌醇（IP3），因此這些SH2和SH3蛋白也具有TPK活性，并放大TPK的信號(hào)，最終將其傳到核內(nèi)的轉(zhuǎn)錄機(jī)構(gòu)，以調(diào)節(jié)特定基因的表達(dá)或通過(guò)改變細(xì)胞內(nèi)蛋白的功能狀態(tài)，使細(xì)胞的代謝水平發(fā)生變化，已證實(shí)HerbimycinA直接抑制PLC-r。因此，HyperApoB的細(xì)胞缺陷可能存在于跨膜受體TPK，也可能存在于原型細(xì)胞質(zhì)信號(hào)蛋白的識(shí)別和結(jié)合方式。

從目前的資料來(lái)看，木黃酮對(duì)BPⅠ生物活性的抑制不是通過(guò)降低HMGCoA還原酶的活性而實(shí)現(xiàn)的，因?yàn)槟军S酮能抑制甲羥戊酸內(nèi)酯轉(zhuǎn)變成非酯化膽固醇，而不能抑制HMGCoA還原酶的磷酸化。Sato已經(jīng)闡明HMGCoA還原酶的磷酸化可降低其催化能力，如果木黃酮抑制了HMGCoA還原酶的磷酸化，那么將使膽固醇的生物合成增加而不是降低，但是這樣無(wú)法解釋經(jīng)木黃酮處理的正常成纖維細(xì)胞和HyperApoB細(xì)胞內(nèi)總膽固醇和非酯化膽固醇的量顯著減少而膽固醇酯的變化不大的現(xiàn)象。