《組織學(xué)與胚胎學(xué)》 （六）原位雜交術(shù)

原位雜交術(shù)（in situ hybridization）是一種核酸分子雜交技術(shù)，它是通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)mRNA和DNA序列片段，原位研究細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基

圖1－11 大鼠肝大部切除后再生過(guò)程中增殖期肝細(xì)胞

攝取3H標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷放射自顯影像

↑ 增殖期肝細(xì)胞核

因表達(dá)。其基本原理是根據(jù)兩條單鏈核苷酸互補(bǔ)堿基序列專一配對(duì)的特點(diǎn)，應(yīng)用已知堿基序列并具有標(biāo)記物的RNA或DNA片段即核酸探針（probe），與組織切片或細(xì)胞內(nèi)的待測(cè)核酸（RNA或DNA片段）進(jìn)行雜交，通過(guò)標(biāo)記物的顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位。此項(xiàng)技術(shù)需首先制備某種核酸探針，其種類主要有三種：①利用大肝桿菌重組帶有目的基因的質(zhì)粒DNA，制成互補(bǔ)DNA探針(cDNA);②應(yīng)用限制性核酸內(nèi)切酶消化制成線性DNA模板，在體外轉(zhuǎn)錄獲得反意RNA探針(cDNA);③依照待測(cè)核酸的核苷酸序列，應(yīng)用DNA合成儀合成寡聚核苷酸探針。cRNA和cDNA的常用標(biāo)記物有32S、32P、3H等放射性核素和熒光素、生物素、地高辛等非放射性物質(zhì)。組織學(xué)應(yīng)用的原位雜交術(shù)主要是染色體原位雜交和細(xì)胞原位雜交。前者是研究遺傳基因、抗原基因、受體基因、癌基因等在染色體上的定位與表達(dá)；后者是研究細(xì)胞某種蛋白質(zhì)的基因轉(zhuǎn)錄物mRNA在胞質(zhì)內(nèi)的定位與表達(dá)（圖1－7，1－12）。核酸分子雜交術(shù)有很高的敏感性和特異性，它是免疫細(xì)胞化學(xué)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步從分子水平探討細(xì)胞功能的表達(dá)及其調(diào)節(jié)機(jī)制的，已成為當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。

圖1－12 原位雜交術(shù)光鏡像

A32P標(biāo)記胰島素cRNA探針?lè)派渥燥@影顯示大鼠胰島B細(xì)胞內(nèi)胰島素mRNa

B 地高辛－堿性磷酸酶標(biāo)記胰島素cRNA探針顯示大鼠胰島B細(xì)胞內(nèi)胰島素mRNA

C 地高辛－堿性磷酸酶標(biāo)記心鈉素cRNA探針顯色示體外培養(yǎng)的人胎兒臍靜脈

內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的心鈉素mRNA ×850

（第三軍醫(yī)大學(xué)蔡文教授供圖）