《中國生物制品規(guī)程》 吸附精制白喉類毒素制造及檢定規(guī)程

本品系精制白喉類毒素經氫氧化鋁吸附制成。用于預防白喉。

1　毒素制造

1.1菌種

1.1.1　應選用中國藥品生物制品檢定所分發(fā)或同意的白喉桿菌PW8株，或經由PW8株篩選的產毒高、免疫力強的菌種。必要時可對菌種進行篩選。

1.1.2　菌種宜用凍干法保存。亦可用血清斜面或產毒培養(yǎng)基傳代保存，但代數(shù)不宜過多。

1.2　培養(yǎng)基

宜用胰酶牛肉消化液培養(yǎng)基或其他適宜培養(yǎng)基，但不得采用馬肉或其他馬體組織，應盡量減少對人體引起過敏反應的物質，不應含有可以引起人體毒性反應的物質。

1.3　毒素

1.3.1　毒素制造過程應嚴格控制雜菌污染。凡經鏡檢或純菌試驗發(fā)現(xiàn)污染者應廢棄。

1.3.2　用于生產的毒素效價不得低于150Lf/ml。

1.3.3培養(yǎng)物加甲醛溶液或甲苯殺菌后進行精制或過濾后進行脫毒。所用化學原料應符合《中國生物制品主要原材料試行標準》。

2　精制

2.1毒素或類毒素可采用硫酸銨活性炭二段鹽析法或其他適宜方法精制。

2.2用于精制的毒素或類毒素可多批混合，但不得超過5批。

2.3精制過程應避免染菌，透析過程可加適量防腐劑，有肉眼可見染菌者應廢棄。

2.4　化學原料等級應不低于化學純。

2.5用同一菌種、培養(yǎng)基處方、精制方法制造的類毒素在同一容器內混合均勻后除菌過濾者為1批。除菌不徹底者可重濾。

3　類毒素制造

3.1制造過程應減少污染機會，如有肉眼可見染菌應予廢棄。

3.2　毒素或精制毒素中加入適量的甲醛溶液，置適宜溫度進行脫毒。精制毒素亦可加適量賴氨酸后再加甲醛脫毒。所用化學原科等級不應低于化學純。

3.3　脫毒試驗

每瓶類毒素或精制類毒素取樣，用滅菌生理鹽水分別稀釋至100Lf/ml，用體重2.0kg左右的家兔2只，每只動物分別皮內注射上述稀釋樣品各0.1ml及25倍稀釋的錫克毒素0.1ml,于96小時判定結果。樣品注射部位須無反應或僅有幾無可量的反應，錫克反應須為陽性。

3.4　脫毒不完全者可繼續(xù)脫毒，必要時可補加適量甲醛溶液。

3.5　用于生產的類毒素效價不應低于100Lf/ml。

3.6　毒性逆轉試驗

每瓶精制類毒素取樣，用pH7.0～7.4磷酸鹽緩沖鹽水分別稀釋至30～50Lf/ml，置37℃20～30天，用體重2.0kg左右的家兔2只，每只家兔分別皮內注射上述稀釋樣品各0.1ml及25倍稀釋的錫克毒素0.1ml，于72小時判定結果。樣品注射部位紅腫反應直徑不應超過15mm，錫克反應須為陽性。

3.7　精制類毒素應加0.01%(g/ml)硫柳汞為防腐劑，毒素精制法制造的精制類毒素未除游離甲醛者可免加防腐劑。

3.8　類毒素保存于2～8℃，自脫毒合格之日起不得超過3年。

4　精制類毒素檢定和保存

4.1pH應為6.4～7.4

4.2　無菌試驗

按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行

4.3　純度

應不低于1500Lf/mgPN。

4.4　安全試驗

用生理鹽水將各亞批等量混合的精制類毒素稀釋成50Lf/ml，用體重300～400g豚鼠4只，每只腹側皮下注射5ml，觀察30天。前5日注意觀察注射局部，第10、20、30天稱取體重。觀察期間每只動物體重不得持續(xù)下降，到期每只動物體重應比注射前增加，注射局部無壞死，無連片脫皮、脫毛。后期不得有麻痹癥狀。

4.5　效力試驗

將各亞批等量混合的精制類毒素稀釋成35Lf/ml，用體重270～350g健康豚鼠5只，每只皮下注射0.5ml，第30天各攻擊10MLD白喉毒素。用于配制含有百日咳菌苗的制品，可按成品比例與百日咳菌苗配成小量二聯(lián)制劑樣品，免疫方法與劑量同上，第30天各皮下攻擊50MLD白喉毒素。二種攻毒均觀察7日，攻擊后動物死亡數(shù)不得超過20%。同時另用體重240～270g健康豚鼠3只，各皮下攻擊1MLD白喉毒素作對照，其中2只應在96小時內死亡，允許1只晚死或發(fā)病。

4.6　保存與效期

保存于2～8℃。自精制之日起效期為3年半。

5　吸附劑的配制

見《吸附精制破傷風類毒素制造及檢定規(guī)程》中5項。

6　吸附精制類毒素的制造

6.1吸附制品應含精制白喉類毒素30～50Lf/ml。

6.2氫氧化鋁用量不得超過3mg/ml。

6.3　吸附制品應加0.005%～0.01%（g/ml）硫柳汞為防腐劑。

6.4　同批精制類毒素及同批吸附劑吸附的制品為1批。用大罐吸附者每罐為1批，所用精制類毒素及吸附劑可多批混合，但各不得超過3批。

7　成品檢定

7.1理化性狀

7.1.1　吸附精制白喉類毒素振蕩后應為乳白色均勻懸液，無搖不散的凝塊或異物。

7.1.2pH值應為6.0～7.0。

7.1.3　氫氧化鋁含量不應超過3mg/ml。

7.1.4　氯化鈉含量為0.75%～0.9%（g/ml）。

7.1.5硫柳汞含量不應超過0.01%（g/ml）。

7.1.6　游離甲醛含量不應超過0.02%（g/ml）。

7.2　無菌試驗

按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。

7.3　安全試驗

每亞批取樣等量混合，用體重300～400g健康豚鼠4只，每只腹側皮下注射2.5ml，觀察30天，注射部位可有浸潤，經5～10天變成硬結，30天可吸收不完全，在第10、20、30天稱體重，到期每只動物體重比注射前增加，豚鼠無晚期麻痹者評為合格。

7.4　效力試驗

每亞批取樣等量混合，用體重300～350g健康豚鼠5只，每只皮下注射0.1ml，第30天各皮下攻擊200MLD白喉毒素，觀察7日，攻毒后動物死亡數(shù)不應超過20%。同時另用體重240～270g健康豚鼠3只，各皮下攻擊1MLD白喉毒素作對照，其中2只應在96小時內死亡，允許1只晚死或發(fā)病。

亦可按WHO推薦的效力試驗方法（見附錄）進行。

7.5　穩(wěn)定性試驗

生產工藝有改變時應做穩(wěn)定性試驗。抽三批不同批號的精制類毒素配制的成品，保存于2～8℃，在效期結束之日進行效力檢定，應符合規(guī)程要求。

7.6　鑒別試驗

抽取樣品加構櫞酸鈉將吸附劑溶解后作絮狀試驗，或將樣品調pH至9.0作凝膠免疫沉淀試驗，以出現(xiàn)絮狀反應或免疫沉淀反應者為合格。

8　保存與效期

保存于2～8℃。自吸附之日起效期為3年。