《中國生物制品規(guī)程》 B、人二倍體細(xì)胞脊髓灰質(zhì)炎活疫苗

1　毒種

與A1項(xiàng)相同。

2　細(xì)胞

2.1　細(xì)胞株

用于疫苗生產(chǎn)的人二倍體細(xì)胞株必須不含外源因子，核型正常，對病毒敏感?？捎肒MB-17、2BS等株。所用細(xì)胞株須經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)。

2.2　原始細(xì)胞種子批

一個(gè)細(xì)胞種子批，應(yīng)有足夠量的早世代細(xì)胞，分裝安瓿保存于液氮中。

2.3　生產(chǎn)用細(xì)胞種子批

用一個(gè)或多個(gè)安瓿細(xì)胞種子，傳代繁殖到適宜世代，具有一定量的均一細(xì)胞，分裝安瓿，凍存于液氮中。

2.4　生產(chǎn)用細(xì)胞種子批檢定

按《人二倍體細(xì)胞建株、檢定及制備疫苗規(guī)程》要求進(jìn)行。

3　疫苗制備

3.1　細(xì)胞培養(yǎng)

從生產(chǎn)用細(xì)胞種子開始培養(yǎng)，以適宜分種率連續(xù)傳代，直至累積足夠量的細(xì)胞培養(yǎng)物。用于生產(chǎn)的細(xì)胞代次應(yīng)在整個(gè)生命周期的前2/3代次內(nèi)。

3.2　病毒接種、培養(yǎng)與收集

與A2.2項(xiàng)相同。

3.3　病毒液合并

與A2.3項(xiàng)相同。

3.4加氯化鎂與分批

與A2.4項(xiàng)相同。

3.5　分裝

與A2.5項(xiàng)相同。

4　檢定

4.1　生產(chǎn)用人二倍體細(xì)胞外源因子檢查

于種毒當(dāng)天，每批細(xì)胞留取2%～5%不種毒，換液作為正常細(xì)胞對照，以檢查外源因子。從接種之日起，觀察2周，其形態(tài)不應(yīng)有改變。

于種毒0～2天，對照細(xì)胞上清液接種原代幼兔腎、非人靈長類傳代細(xì)胞及另一株人二倍體細(xì)胞。接種的樣品量應(yīng)占維持液的20%以上，觀察14天。種毒后5～8天用上述細(xì)胞盲傳一代，傳代后觀察14天，應(yīng)無細(xì)胞病變。

在種毒時(shí)，用0.5%雞、豚鼠混合紅細(xì)胞在4～8℃和20～25℃做血吸附試驗(yàn)，檢查對照細(xì)胞。

4.2細(xì)胞鑒別試驗(yàn)

在生產(chǎn)用細(xì)胞水平世代或其后數(shù)代，作中期細(xì)胞染色體檢查，粗?jǐn)?shù)300個(gè)細(xì)胞，細(xì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，其核型應(yīng)正常。以鑒別確為生產(chǎn)用細(xì)胞無誤。

4.3　病毒液檢定

4.3.1　外源因子檢查

樣品以脊髓灰質(zhì)炎病毒型特異性抗體（非人源抗體，該抗體不能用猴制備，免疫用的抗原不能用生產(chǎn)用的細(xì)胞制備）或單克隆抗體中和，中和物（可稀釋，但稀釋度不應(yīng)超過1∶4）接種對麻疹病毒敏感的細(xì)胞和另一株人二倍體細(xì)胞，并留取正常細(xì)胞對照，37℃培養(yǎng)觀察2周。觀察期間由于非特異原因廢棄的細(xì)胞瓶數(shù)應(yīng)少于20%。如發(fā)生任何因外源因子引起的細(xì)胞病變，則該批病毒液應(yīng)廢棄。

4.3.2　無菌試驗(yàn)及支原體檢查

與A3.2.2項(xiàng)相同。

4.3.3　病毒滴定

結(jié)果判定蝕斑法為4～6天，其他同A3.2.3項(xiàng)。

4.3.4　型特異性檢定

與A3.2.4項(xiàng)相同。

4.3.5　猴體試驗(yàn)

與A3.2.6項(xiàng)相同。

4.3.6rct特征試驗(yàn)

與A3.2.7項(xiàng)相同。

4.4　成品檢定

與A3.3項(xiàng)相同。

5　保存與效期

與4項(xiàng)相同。