《免疫學(xué)和免疫學(xué)檢驗(yàn)》 二、斑點(diǎn)免疫層析試驗(yàn)

（一）原理

斑點(diǎn)免疫層析試驗(yàn)（dotimmunochromatographicassay，DICA）簡稱免疫層析試驗(yàn)（ICA），也以硝酸纖維素膜為載體，但利用了微孔膜的毛細(xì)血管作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲移，猶如層析一般。

（二）試劑和操作

免疫層析試驗(yàn)以單克隆雙抗體夾心法為例。試驗(yàn)所用試劑全部為干試劑，多個試劑被組合在一個約6mm×70mm的塑料板條上，成為一單一試劑條（圖19-2），試劑條上端（A）和下端（B）分別粘貼吸水材料，免疫金復(fù)合物干片粘貼在近下端（C）處，緊貼其上為硝酸纖維素膜條。硝酸纖維素膜條上有兩個反應(yīng)區(qū)域，測試區(qū)（T）包被有特異抗體，參照區(qū)（R）包被有抗小鼠IgG。

圖19-2 免疫層析試驗(yàn)原理示意圖

測定時將試紙條下端浸入液體標(biāo)本中，下端吸水材料即吸取液體向上端移動，流經(jīng)C處時使干片上的免疫金復(fù)合物復(fù)溶，并帶動其向膜條滲移。若標(biāo)本中有待測特異抗原，其時可與免疫金復(fù)合物之抗體結(jié)合，此抗原抗體復(fù)合物流至測試區(qū)即被固相抗體所獲，在膜上顯出紅色反應(yīng)線條（T）。過剩的免疫金復(fù)合物繼續(xù)前行，至參照區(qū)與固相小鼠IgG結(jié)合（免疫金復(fù)合物中的單克隆抗體為小鼠IgG），而顯出紅色質(zhì)控線條（R）。反之，陰性標(biāo)本則無反應(yīng)線條，而僅顯示質(zhì)控線條。

斑點(diǎn)免疫層析試驗(yàn)在試劑形式和操作步驟上較前述的幾種免疫測定法都更為簡化，只用一個試劑，只有一步操作。