《醫(yī)學(xué)微生物學(xué)》 三、微生物學(xué)診斷

（一）病毒分離

病人急性期血液、尸檢組織或感染動(dòng)物的肺、腎等組織均可用于病毒分離，組織需研磨成懸液。常用Vero-E6細(xì)胞分離培養(yǎng)，培養(yǎng)7～14天后，用免疫熒光染色法檢查細(xì)胞內(nèi)是否有病毒抗原，胞漿內(nèi)出現(xiàn)黃綠色顆粒熒光為陽(yáng)性。也可取檢材接種易感動(dòng)物來(lái)分離病毒，常用者為小白鼠乳鼠，通過(guò)腹腔或腦內(nèi)接種，接種后逐日觀察動(dòng)物有無(wú)發(fā)病或死亡，并定期取動(dòng)物腦、肺等組織，冰凍切片或?qū)⒔M織研磨成懸液后分別用免疫熒光法或ELISA檢查是否有病毒抗原。用細(xì)胞或動(dòng)物分離培養(yǎng)陰性者繼續(xù)盲傳，連續(xù)三代陰性者方能肯定為陽(yáng)性。此外在進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)采取嚴(yán)格的隔離及防護(hù)措施，以防止發(fā)生實(shí)驗(yàn)室感染。

（二）血清學(xué)檢查

1．檢測(cè)特異性lgM 抗體：此抗體在發(fā)病后第1～2天即可檢出，急性期陽(yáng)性率可達(dá)95%以上，因此檢測(cè)此抗體具有早期診斷價(jià)值。根據(jù)情況可選用間接免疫熒光法（IFAT）和ELISA，后者又可分為lgM捕捉法和間接法，其中以lgM捕捉法的敏感性和特異性為最好。

2．檢測(cè)特異性lgG抗體：病后特異性lgg 抗體出現(xiàn)較早，維持時(shí)間很長(zhǎng)，因此需檢測(cè)雙份血清（間隔至少一周），恢復(fù)期血清抗體滴度比急性期升高4倍以上可確診。常用檢測(cè)方法為IFAT和ELISA。此兩種方法還可用于血清流行病學(xué)調(diào)查。

3．檢測(cè)血凝抑制抗體：采用血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)病人血清中的特異性血凝抑制抗體，在輔助診斷和流行病學(xué)調(diào)查中也較常用。