《細(xì)胞和分子免疫學(xué)》 一、抗獨(dú)特抗體的制備

（一）抗原及其用量的選擇

由于Ab2是針對(duì)Ab2Id的抗體，因而制備Ab2時(shí)應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)腁b1作為免疫原。所用抗原的用量依照給予抗原的種類、次數(shù)、途徑以受體動(dòng)物的耐受性而有所不同。一般來(lái)說(shuō)，當(dāng)受體動(dòng)物為小鼠時(shí)，常用Ab1最為50-200μg；若受體動(dòng)物為家兔時(shí)，使用的Ab1量可達(dá)100-200μg。

（二）免疫動(dòng)物的選擇

抗獨(dú)特型抗體可在自身體內(nèi)、同類系、同種異體以及異種動(dòng)物中誘導(dǎo)產(chǎn)生，因此在制備抗獨(dú)特型抗體時(shí)可根據(jù)不同情況選用同類系、同種異體或異種動(dòng)物（表9-1）。從制備技術(shù)上講，可以制備單克隆抗Id和多克?。庖哐澹┛笽d。

表9-1 不同宿主免疫系統(tǒng)識(shí)別的抗體決定簇及抗獨(dú)特型抗體的制備

受體動(dòng)物（應(yīng)答者）提供Ab1的動(dòng)物（刺激者）Ab1分子上的抗原決定簇類型產(chǎn)生Ab2的類型家兔BALB/c小鼠同種型抗同種型獨(dú)特型抗同種型C59BL/6小鼠BALB/c小鼠同種異型抗同種異型獨(dú)特型抗同種型BALB/c小鼠BALB/c小鼠獨(dú)特型抗同種型

1.同類系動(dòng)物　用某一種抗原免疫某一品系的動(dòng)物，分離純化的Ab1再免疫相同品系的另外一只動(dòng)物，可獲得抗獨(dú)特型體。例如Uytdegaag等將Ⅱ型脊髓灰質(zhì)炎病毒免疫BALB/c小鼠，經(jīng)雜交瘤技術(shù)制備了單克隆抗體（Ab1）,再用Ab1免疫BALB/c小鼠，制備了單克隆Ab2。

2.同種異型動(dòng)物　Seto等從一只品系為a3b4家兔血清中純化出IgG作為Ab1，然后免疫B/J品系家兔，得到了含有Ab2的免疫血清。用此方法制備的抗血清中，除了含有抗Id外，還含有抗同種異型決定簇的抗體。

3.異種動(dòng)物　例如用人IgM作為Ab1免疫小鼠制備單克隆Ab2。由異種動(dòng)物免疫制備的Ab2血清中，除抗Id外還含有抗同種型的抗體。

（三）抗獨(dú)特型抗體的檢測(cè)

抗Id抗體的鑒定至關(guān)重要。通常采用免疫學(xué)檢測(cè)方法如ELISA、RIA、免疫熒光和中和試驗(yàn)等，可根據(jù)具體條件和需要加以選用?？笽d的鑒定必須設(shè)置充分的對(duì)照，確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性。例如，在鑒定小鼠源性抗原特異性人IgM抗獨(dú)特型抗體時(shí)，用正常人IgM作為對(duì)照。將Ab1（抗原特異性人IgM）包被微孔板，然后加檢測(cè)樣品（小鼠源性抗Id），再加抗鼠的標(biāo)記抗體，為了克服非特異性鼠抗人IgM同種型Ig造成的假陽(yáng)性，同時(shí)用非特異性人IgM包被微板作為對(duì)照（圖9-9）。當(dāng)試驗(yàn)孔為陽(yáng)性、對(duì)照孔為陰性時(shí)可基本確定為抗Id抗體。

圖9-9 用ELISA間接法檢測(cè)鼠源性單克隆抗Id示意圖